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蛋白提取

柱式动物组织/细胞总蛋白抽提试剂盒

产品概述

本试剂盒创新性地采用过柱纯化的方法,能够快速、温和、高效地裂解动物组织或细胞,有效提取总蛋白。试剂盒同时提供变性和天然两种裂解液,用户可根据下游实验需求进行选择。整个提取过程仅需要1~8min,由于采用过柱纯化技术,最小可处理20μL样本与裂解液混合物,最大可达500μL,提取的蛋白溶液浓度可达2~8mg/mL,并可有效避免蛋白丢失。所提蛋白可采用BCA法进行蛋白定量分析(货号:ZJ101或ZJ102),但不宜使用Omni-RapidTM快速蛋白定量试剂盒(货号:ZJ103)。

产品内容

  • pc201.png

产品特点

  • 操作简单快速

    最快1min即可得到变性总蛋白
  • 无蛋白丢失

    可打开DNA双链,高效获取与DNA结合的蛋白
  • 小样本量、高得率

    最小可处理20μL样本与裂解液混合物,提取的蛋白溶液浓度可达2~8mg/mL
  • 适用多种实验

    含有两种裂解液,既可用于提取变性蛋白质,也可提取天然蛋白质

使用说明

  •    ◆

    提取变性总蛋白
    1. 将纯化柱及收集管放在冰上预冷;
    2. 样品处理(取适当量的变性裂解液,在使用前数分钟将蛋白酶抑制剂混合液 按1:100加入其中;PC201plus已包含蛋白酶抑制剂混合液,PC201则需额外购买<货号:grf101>。)
        2a. 贴壁细胞:将预冷的1×PBS(货号:PS110)直接加入培养板、培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞,吸去上清。按照附表(文末)中将相应体积的变性裂解液均匀地加入整个器皿表面,用移液器吹打几次;
        2b. 悬浮细胞:低速离心收集细胞,在1.5 mL离心管中加入预冷的1×PBS,涡旋震荡,3,000rpm离心2~3min清洗细胞。吸去多余上清,留下与细胞相同体积的PBS,涡旋震荡重悬细胞。加入附表中相应体积的变性裂解液,涡旋震荡裂解细胞;
        注意:
            ①部分未完全裂解的细胞不会影响后续蛋白提取效果;
            ②加入裂解液后,如果细胞裂解物太过粘稠,无法用200~1,000μL吸头吹打,可将细胞裂解物直接倒入纯化柱中,进行后续操作。

        2c. 组织样本:将15~20mg组织放置于纯化柱上,用塑料研磨棒扭转研磨50~60次,加入200μL变性裂解液,继续研磨30~60次。如样本起始量较大或者较小,需按比例调整相应裂解液的用量;
        注意:塑料研磨棒可以重复使用,请用蒸馏水彻底冲洗干净,并用纸巾擦干。
    3. 离心
        3a. 贴壁细胞或悬浮细胞:将裂解后的细胞转移到预冷的纯化柱套管中,14,000~16,000 rpm离心30 s取出;
        3b. 组织样本:盖上纯化柱盖子室温孵育1~2 min,14,000~16,000 rpm离心1~2 min取出;
    4. 立刻将收集管放置于冰上,弃去纯化柱,变性总蛋白提取完成。

  •    ◆

    提取天然总蛋白
    1. 将天然裂解液、纯化柱及收集管放在冰上预冷;
    2.样品处理(取适当量的天然裂解液,在使用前数分钟将蛋白酶抑制剂混合液按1:100加入其中;PC201plus已包含蛋白酶抑制剂混合液,PC201则需额外购买<货号:grf101>。)
        2a. 贴壁细胞:将预冷的1×PBS(货号:PS110)直接加入培养板,培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞,吸去上清。按照附表中将相应体积的天然裂解液均匀地加入整个器皿表面,放置于冰上孵育3~5min,用移液器吹打几次;
        2b. 悬浮细胞:低速离心收集细胞,在1.5mL离心管中加入预冷的1×PBS,涡旋震荡,3,000rpm离心2~3min清洗细胞。吸去多余上清,留下与细胞相同体积的PBS,涡旋震荡重悬细胞。加入附表中相应体积的天然裂解液,涡旋震荡裂解细胞15s。将离心管放置于冰上3~5min,然后涡旋震荡10s;
        注意:
            ①部分未完全裂解的细胞不会影响后续蛋白提取效果;
            ②加入裂解液后,如果细胞裂解物太过粘稠,无法用200~1,000 μL吸头吹打,可将细胞裂解物直接倒入纯化柱中,进行后续操作。

        2c. 组织样本:将15~20mg组织放置于纯化柱上,用塑料研磨棒扭转研磨50~60次,加入200μL天然裂解液,继续研磨30~60次。如样本起始量较大或者较小,需按比例调整相应裂解液的用量;
        注意:塑料研磨棒可以重复使用,请用蒸馏水彻底冲洗干净,并用纸巾擦干。
    3.离心
        3a. 贴壁细胞或悬浮细胞:将裂解后的细胞转移到预冷的纯化柱套管中,14,000~16,000rpm离心30s取出;
        3b. 组织样本:开盖冰上孵育5min,盖上纯化柱盖子,4℃,14,000~16,000rpm离心1~2min取出;
    4.立刻将收集管放置于冰上,弃去纯化柱,天然总蛋白提取完成。

附表 细胞数量与所需裂解液体积之间的关系

pc2011.png

注意事项

1. 若使用本试剂盒裂解液裂解样本所得产物比较粘稠,此为正常现象;

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;

3. 本产品仅限科研使用。

文献列表(部分展示)

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