569vip威尼斯登录入口(中国)主页登录

网站首页

琼脂糖磁珠及免疫凝胶

GST标签蛋白纯化琼脂糖凝胶

货号

产品概述

本产品可用于纯化各种表达系统融合表达的GST重组蛋白,其是以由高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质,通过12个原子的间隔臂,用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成。

产品参数

yj105.png

自备试剂

yj1051.png

操作步骤

  •    ◆

    样本处理(以大肠杆菌表达系统为例)
        1. 离心收集大肠杆菌(4℃,4,000×g,30min),弃上清;
        2. 用冷1×PBS(货号:PS110)重悬细胞, 如果需要,可加入适量的添加剂,如非离子去污剂(NP-40)或蛋白酶抑制剂(货号:GRF101)。
        3. 用超声波破碎法在冰上破碎菌体,直到样品破碎完全;
        4. (可选)如果裂解物太过粘稠,可以加入RNase A(终浓度10μg/mL)和DNase I(终浓度5μg/mL)并在冰上孵育10~15min;
        5. 离心收集上清(4℃,12,000×g,20min);
        6. SDS-PAGE分析His融合蛋白的含量及可溶性;

  •    ◆

    纯化重组GST融合蛋白
        7. 轻轻重悬GST标签蛋白纯化琼脂糖凝胶,吸取适量加入重力柱中,用10倍柱体积的冷1×PBS(货号:PS110)平衡GST琼脂糖凝胶;
        8. 将步骤5制备好的含有GST融合蛋白的上清液加入到纯化柱中,流速控制为0.5~1mL/min;
        9. 蛋白上清液全部流出纯化柱后,立刻加入1×PBS清洗纯化柱,所需量大约为柱体积的20倍或者直到流出液的A280值达到最低且稳定;
        10. 用10~15倍柱体积的现配洗脱缓冲液以0.5~1mL/min的流速洗脱,收集洗脱液。或者根据流出液A280值判断,当数值陡然上升时开始接收洗脱液,直到A280数值降至最低且稳定时,停止收集。后续可根据目的蛋白的性质和用途,4℃透析到20mM Tris-HCl,pH8.0或者1×PBS,pH7.4中,以去除游离的谷胱甘肽。

  •    ◆

    凝胶再生及储存
            GST标签蛋白纯化琼脂糖凝胶 可以重复使用,但随着使用次数增多,非特异性结合的蛋白聚集往往会造成流速和蛋白结合载量的下降,这时便需要对琼脂糖凝胶填料进行清洗。
        11. 使用5倍纯化柱体积去离子水清洗琼脂糖凝胶填料;
        12. 使用2倍柱体积的6M盐酸胍溶液进行清洗;
        13. 使用5倍柱体积去离子水清洗填料;
        14. 使用3~4倍柱体积70%乙醇或2倍柱体积的1%Triton X-100清洗填料;
        15. 使用5倍柱体积去离子水清洗填料,即完成琼脂糖凝胶填料再生。
        注:填料再生后,可以立即使用,如不立即使用,需要将填料悬浮于等体积的20%乙醇中,置于4℃保存。

常见问题解析

  • YJ105-3.png

注意事项

1. 琼脂糖凝胶应保存在储存溶液中,防止干燥;

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;

2. 本产品仅限科研使用。

产品中心 / 蛋白表达纯化与分离 / 琼脂糖磁珠及免疫凝胶

返回产品列表

联系569vip威尼斯登录入口

上海市闵行区立跃路2995号1号楼5楼

info@epizyme.cn

400-058-8030

如有任何关于569vip威尼斯登录入口产品问题
欢迎来信咨询

569vip威尼斯登录入口微信公众号

Copyright © 2023569vip威尼斯主页登录(Epizyme Biotech)

沪ICP备2021002422号