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琼脂糖磁珠及免疫凝胶

His标签蛋白纯化琼脂糖磁珠

货号

产品概述

His标签蛋白纯化琼脂糖磁珠是一种新型功能化材料,用于高效、快速纯化His标签融合蛋白,可通过磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白,操作起来简便高效。

产品参数

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自备试剂

YJ106-2.png

操作步骤

  •    ◆

    样本处理(以大肠杆菌表达系统为例)
        1. 离心收集大肠杆菌(4℃,4,000×g,30min),弃上清;
        2. 用冷平衡缓冲液重悬细胞,同时加入蛋白酶抑制剂(货号:GRF101);
            注:所用试剂中不能含有EDTA、EGTA等螯合剂,DTT、巯基乙醇等还原剂,尿素、盐酸胍等变性剂。
        3. 用超声波破碎法在冰上破碎菌体,直到样品破碎完全;
        4. (可选)如果裂解物太过粘稠,可以加入RNase A(终浓度10μg/mL)和DNase I(终浓度5μg/mL)并在冰上孵育10~15min;
        5. 离心收集上清(4℃,12,000×g,20min);
        6. SDS-PAGE分析His融合蛋白的含量及可溶性;

  •    ◆

    磁珠预处理
        7. 将His标签蛋白纯化琼脂糖磁珠颠倒数次,使其充分混匀,取所需量的磁珠悬液,转移至离心管中,接着在磁力架上静置1min,待磁珠吸附到离心管侧壁上后,吸弃上清;
        8. 加入与琼脂糖磁珠等体积的冷平衡缓冲液,用移液器反复吹打5~10次,接着在磁力架上静置1min,待磁珠吸附到离心管侧壁上后,吸弃上清;
        9. 重复步骤 3 两次;

  •    ◆

    磁珠与目的蛋白结合
        10. 结合:将步骤5制备好的含有His融合蛋白的上清液加入预处理好的磁珠,置于翻转混合仪上孵育(常温30min,也可置于2~8℃孵育1h或者过夜),接着在磁力架上静置1min,待磁珠吸附到离心管侧壁上,溶液变澄清后,把上清液转移到新的离心管中备用(上清液可用于检测抗体是否存在残留),离心管中剩余的即为目的蛋白-磁珠复合物;
        11. 漂洗:在上一步得到的目的蛋白-磁珠复合物中加入2倍琼脂糖磁珠体积的漂洗缓冲液,用移液器反复吹打5~10次,接着在磁力架上静置1min,待磁珠吸附到离心管侧壁上,溶液变澄清后,吸弃上清。再重复此步骤两次;

  •    ◆

    洗脱
        12. 向洗涤后的目的蛋白-磁珠复合物中加入2~5倍琼脂糖磁珠体积的洗脱缓冲液,置于翻转混合仪上孵育(常温5~10min),接着在磁力架上静置1min,待磁珠吸附到离心管侧壁上,溶液变澄清后,吸取上清,收集洗脱组分,即为目的蛋白。

  •    ◆

    磁珠保存
        13. 向使用后的琼脂糖磁珠中加入1~3倍其体积的洗脱缓冲液 ,用移液器反复吹打5次,使磁珠彻底重悬,接着在磁力架上静置1min,待磁珠吸附到离心管侧壁上,溶液变澄清后,吸弃上清。再重复此步骤两次;
        14. 向离心管中加入1~3倍琼脂糖磁珠体积去离子水,用移液器反复吹打5次,使磁珠彻底重悬,接着在磁力架上静置1min,待磁珠吸附到离心管侧壁上,溶液变澄清后,吸弃上清。再重复此步骤两次;
        15. 在琼脂糖磁珠中加入 20%乙醇,使总体积等于初始悬浮液体积,置于 4~8℃保存。

常见问题解析

  • YJ106-3.png

注意事项

1. 琼脂糖磁珠使用前应充分混匀;

2. 琼脂糖磁珠应保存在储存溶液中,防止干燥;

3. 请勿将琼脂糖磁珠冷冻或离心,以免引起不可逆聚集;

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;

5. 本产品仅限科研使用。

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